Clonación y expresión del gen cry57Aa1 a partir de una cepa atípica de Bacillus thuringiensis"

Abstract

El objetivo de este trabajo fue clonar al gen cry57Aa1 a partir de la cepa LBIT-979 de la serovariedad kim de B. thuringiensis, y corroborar su expresión en forma de cristales parasporales. En la primera fase del trabajo se diseñaron los oligonucleótidos Cry57D (directo) y Cry57R (reverso) con el software AnnHyb Versión 4.942, colocando en los extremos las enzimas de restricción SalI y PstI; con el cual se amplificó el fragmento de 1830 pb del gen cry57Aa1. En la segunda parte se realizó una subclonación del fragmento del gen cry57Aa1 en el vector para productos de PCR pCR TOPO 2.1, para ser digeridos con las enzimas de restricción SalI y PstI. Para la segunda fase el fragmento digerido se clonó en el vector de expresión pSTAB. En el cuarto paso se realizó la transformación de las cepas acristalíferas proveniente de B. thuringiensis serovariedad kurstak (Cry-B) y B. thuringiensis serovariedad israelensis (4Q7) con el vector de expresión pSTAB y el fragmento del gen cry57Aa1. Los resultados obtenidos fueron: se logró expresión del fragmento del gen cry57Aa1 en la cepa acristalífera B. thuringiensis serovariedad israelensis (4Q7), obteniendo esporas de forma alargada de 1 μm y cristales que tienen forma de esferas pequeñas. La verificación de la expresión del gen cry57Aa1 se realizó con la extracción de plásmidos por lisis alcalina de la cepa acristalífera, en la cual se obtuvo una banda de la construcción pSTAB/Cry57Aa1 de 9,254 pb, a esta construcción se realizó PCR para amplificar el fragmento cry57Aa1 de 1,830 pb.